西南民族大学考研(西南民族大学考研专业有哪些) _在职研究生考试科目
西南民族大学考研，西南民族大学考研专业有哪些
金黄色葡萄球菌（Staphylococcus aureus）属于革兰氏阳性菌，是一种常见的食源性和医院感染的病原菌，会引起轻微皮肤损伤及严重感染，如肺炎、静脉炎、脑膜炎、乳腺炎、泌尿道感染，以及深度感染，如骨髓炎和心内膜炎。耐甲氧西林金黄色葡萄球菌（MRSA）是金黄色葡萄球菌的一种，对半合成青霉素（甲氧西林、苯唑西林等）具有抗药性。利用万古霉素可有效治疗MRSA引起的感染，但是随着细菌耐药性日益严重，耐万古霉素的菌株也不断被发现。因此，亟需探寻有效且不易引起细菌耐药性的新型防控方法。
噬菌体是地球上数量可观的一类生物体，具有特异性强、不易引起细菌抗性等特点。近年来，由于细菌耐药性日渐严重，噬菌体在抗菌方面的研究备受关注。西南民族大学青藏高原研究院的侯忠余、唐俊妮*等旨在分离可裂解MRSA的噬菌体，探究噬菌体对MRSA生物被膜的影响以及在食品中的初步应用，以期为食品中MRSA的生物防控提供理论依据。
01
噬菌体初筛菌株的鉴定
如图1所示，菌株ATCC 43300、MRSA 2和MRSA 29 3 株菌均可在174 bp附近形成特异性mecA条带，确认3 株菌均为MRSA菌株。以MRSA 2和MRSA 29作为后续噬菌体初筛菌株。
02
噬菌体的分离纯化
从奶牛养殖场采集的污水在经过3次富集后，利用双层平板法观察发现，初筛菌株中在MRSA 2菌株对应的平板上形成了明显、密集且呈圆形透明的噬菌斑（图2A）。进一步将分离得到的噬菌体经过3～5次纯化后，得到斑块透亮、边缘整齐、大小均一、形态一致、纯度较高的噬菌体（图2B），将其命名为P65。经测定，分离的噬菌体效价为1.11h105 PFU/mL，进一步增殖后其效价可达1.14h108 PFU/mL。
03
噬菌体P65的理化性质
噬菌体透射电镜观察
如图3所示，噬菌体P65头部呈多面体结构，具有非收缩性细长、柔软的尾部，整体长度（236f5）nm、头部直径（71f2）nm、尾部长（165f5）nm。根据冯烨等对噬菌体的分类标准，本实验所分离的噬菌体属于有尾噬菌体目长尾噬菌体科（Siphoviridae）。
噬菌体P65的裂解谱
对本实验室保存的其他16 株MRSA和8 株普通金黄色葡萄球菌进行宿主范围测定时，发现噬菌体P65除对宿主菌MRSA 2可裂解外，还对MRSA 24和8 株普通金黄色葡萄球菌具有裂解效果，具体裂解情况如表1所示。
噬菌体P65的最佳MOI
如图4所示，当MOI=1时，噬菌体P65效价最低，当MOI=0.01时，其效价最高，经计算为2.52h10 8 PFU/mL，因此，MOI=0.01为噬菌体P65的最佳MOI。
噬菌体P65的一步生长曲线
如图5所示，噬菌体和宿主菌混合后侵染0～10 min内，噬菌体增殖不明显，可判断噬菌体P65的潜伏期为10 min；在10 min后噬菌体开始大量增殖，80 min后开始趋于平缓，100 min时达到最大值，此时噬菌体效价为3.83h10 9 PFU/mL。可见，噬菌体P65的裂解周期为90 min；裂解量为35.46 PFU/cell。
pH值对噬菌体P65效价的影响
如图6所示，在pH 2时噬菌体P65全部失活；当pH 4、6、7、8、10时噬菌体P65耐受性变化较小，在pH 12时其活性受到明显抑制。本实验分离的噬菌体P65具有一定的耐酸碱性，且最适pH值为8。
温度对噬菌体P65效价的影响
如图7所示，噬菌体P65在不同温度水浴中处理1 h后，其活性受温度影响显著。噬菌体P65的最适生长温度为30～45 ℃，当温度高于45 ℃时，噬菌体活性开始下降；当温度为70 ℃时，噬菌体失活。本实验分离到的噬菌体P65耐高温性一般，耐受温度为65 ℃。
紫外线照射对噬菌体P65效价的影响
如图8所示，噬菌体P65在紫外线照射处理后，其活性逐渐呈下降趋势，紫外线照射处理70 min后，噬菌体P65效价由0 min的1.91h10 8 PFU/mL降至2.65h10 4 PFU/mL。
04
噬菌体P65的应用效果探索
不同MOI噬菌体对宿主菌的裂解效果
如图9A所示，阳性对照曲线10 h内一直保持上升趋势；与阳性对照相比，不同MOI噬菌体均可很好地抑制宿主菌MRSA 2的生长。0～2 h内，由于噬菌体数量较少，实验组与阳性对照组差异不明显；但3 h后实验组OD 600 nm 明显下降，与阳性对照组差异显著（P＜0.01），说明期间噬菌体抑菌效果好。如图9B所示，噬菌体对宿主菌控制效果较好，细菌培养液澄清。
噬菌体对细菌被膜的清除效果
如图10所示，噬菌体P65对宿主菌MRSA 2和MRSA 24的生物被膜形成均有较好的清除作用。生物被膜经噬菌体处理培养4 h后，MRSA 2和MRSA 24的OD 630 nm 分别由0 h的0.935、0.966降低至0.364、0.340，此时被膜清除率分别为61.0%、64.8%，随培养时间延长，OD 630 nm 逐渐降低，培养48 h，MRSA 2和MRSA 24的被膜清除率分别达91.3%和92.2%，清除效果非常明显。
噬菌体在食品中的初步应用效果
噬菌体对脱脂牛乳中MRSA 2的抑制效果
如图11所示，随时间的延长，对照组MRSA 2菌落数不断上升，在第24小时菌落数达9.25（lg（CFU/mL））；MOI=100组的抑菌效果和对照组无显著差异（P＞0.05）；MOI=10 000、MOI=1 000组在0～6 h内，菌落数呈下降趋势，在第6小时菌落数较对照组分别减少了2.68、1.99（lg（CFU/mL））；6 h后所有实验组菌落数均呈上升趋势。可见，噬菌体在牛乳贮藏前期具有较明显的抑菌作用，且噬菌体浓度越高，抑菌效果越好，但随时间延长噬菌体的抑菌效果可能受牛乳中成分的影响而减弱。
噬菌体对牛肉中MRSA 2的抑制作用
如图12所示，在0～24 h内，对照组菌落数由3.32（lg（CFU/mL））增至7.05 （lg（CFU/mL））；MOI=10 000组抑菌效果比较明显，第12小时菌落数较对照组（6.75（lg（CFU/mL）））减少了2.60（lg（CFU/mL））。MOI=1 000组在第12小时较对照组减少了2.08（lg（CFU/mL））；MOI=100组抑菌效果相对最差。
结论
本研究以MASR菌株为宿主菌，从奶牛养殖场不同环境污水中成功分离到的烈性噬菌体P65，可裂解MASR和其他金黄色葡萄球菌，为噬菌体作为天然抗菌剂的应用奠定一定基础。
本文《1 株金黄色葡萄球菌烈性噬菌体的生物学特性及其裂解效果》来源于《食品科学》2022年43卷8期113-120页，作者：侯忠余，李传友，朱成林，于基成，唐俊妮。DOI:10.7506/spkx1002-6630-20210510-098。点击下方阅读原文即可查看文章相关信息。
修改/编辑：袁艺；责任编辑：张睿梅
图片来源于文章原文及摄图网。
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